La diarrea de corderos lactantes es un síndrome que se caracteriza por producir heces pastosas o acuosas, deshidratación, fiebre, abatimiento y anorexia. Aparece en las tres primeras semanas de vida, siendo una de las principales patologías presentes en las granjas (Imagen 1).
ETIOLOGÍA
Es un proceso multifactorial que depende de agentes infecciosos (Tabla 1) y de factores predisponentes (dependientes del animal y ambientales). En condiciones desfavorables, la microbiota digestiva normal del animal se desequilibra proliferando determinadas poblaciones bacterianas, lo que favorece que los agentes infecciosos desencadenen la enfermedad.
Es fundamental conocer cada uno de los factores predisponentes para poder implantar las mejores medidas de prevención
Tabla 1. Principales agentes infecciosos causantes de la diarrea en corderos lactantes
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
Las muestras más indicadas para el diagnóstico de laboratorio son paquetes intestinales completos correctamente anudados para evitar que se derrame el contenido.
- Se deben elegir aquellas zonas que presentan lesiones e incluso utilizar diferentes tramos en función del agente que se esté buscando.
- Los hisopos rectales con medio de transporte y las heces son también válidos.
- Es importante hacer una buena selección de los animales que se van a muestrear. Enviar muestras de aquellos con clínica característica, no tratados y que hayan sido sacrificados o muertos recientemente.
- Se recomienda siempre muestrear varios animales.
Tras la recogida de las muestras, éstas deben ser enviadas inmediatamente al laboratorio en las siguientes 24 horas, en refrigeración.
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
En el laboratorio se dispone de diferentes herramientas para llegar a un diagnóstico completo y preciso:
CULTIVO MICROBIOLÓGICO
El cultivo microbiológico de las muestras permite la obtención de las cepas patógenas para realizar estudios de sensibilidad antibiótica, tipado, autovacunas, etc. Mediante la tecnología de espectrometría de masas MALDI-TOF se consigue una identificación bacteriana rápida y precisa.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE PCR A TIEMPO REAL (qPCR)
Permite determinar con alta sensibilidad y especficidad la presencia de numerosos agentes patógenos, incluidos aquellos que no se pueden cultivar, como los virus o los parásitos. Además, nos da un valor cuantitativo inversamente proporcional a la cantidad de patógeno (a mayor valor Cq, menor cantidad de patógeno). Además de detectar agentes infecciosos, con la qPCR se puede tipificar las bacterias, aspecto muy importante a la hora de establecer medidas de control. Se aplica fundamentalmente para la detección de factores de virulencia de E. coli y para las toxinas de C. perfringens.
ESTUDIOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
- Antibiograma: se puede realizar el antibiograma mediante la técnica de Kirby Bauer (antibiograma en disco) que indica si una bacteria es sensible, resistente o tiene sensibilidad intermedia frente a un antibiótico.
- Concentración Mínima Inhibitoria (CMI): de mayor utilidad porque muestra la concentración o cantidad más pequeña de antibiótico que inhibe o impide la multiplicación de la bacteria. La CMI permite conocer cuál es el antibiótico más efectivo en la dosis adecuada.
COMPARACIÓN FENOTÍPICA DE CEPAS DE E. COLI
Mediante un dendograma se puede saber qué cepas están presentes en la explotación, cuales son las más prevalentes, etc. Una vez localizadas las distintas cepas, es posible identificar la presencia de factores de virulencia en las mismas para clasificarlas como patógenas y realizar un antibiograma en cada una de ellas. Esto también es muy útil de cara al diseño de una autovacuna.
ESTUDIO HISTOPATOLÓGICO DE LAS LESIONES
Permite valorar cual es el agente primario de las lesiones y orientar el tratamiento y prevención
CASOS CLÍNICOS
CASO 1 Enterotoxemia con participación de E. coli
Se enviaron al laboratorio muestras de digestivo de corderos lactantes de 48-72 horas de vida.
- OBSERVACIONES MACROSCÓPICAS
El intestino delgado presentaba una intensa congestión con contenido líquido de coloración rojiza-negruzca (Imagen 2).
- CULTIVO MICROBIOLÓGICO
En todas las muestras se aisló Escherichia coli y Clostridium perfringens en cultivo puro y masivo.
- PCR A TIEMPO REAL
Mediante qPCR se detectó Clostridium perfringens en elevada concentración (Cq: 23,79). Se descartó la presencia de Rotavirus A y Cryptosporidium parvum.
- FACTORES DE VIRULENCIA DE E. COLI
Se confirmó la presencia de factores de virulencia de gen eae (baja concentración) y fimbria F17 (moderada concentración), indicando la presencia de cepas de Escherichia coli con capacidad patógena.
- COMPARACIÓN FENOTÍPICA DE CEPAS DE E. COLI
Tras la realización del dendograma, encontramos una gran variabilidad de cepas, siendo una de ellas portadora de la fimbria F17 (cepa patógena).
- TOXINOTIPO DE CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
Mediante qPCR se confirmó que la cepa de C. perfringens era productora de toxina Alfa y toxina Beta-2, clasificándose como Clostridium perfringens tipo A positivo a toxina Beta-2.
- ESTUDIO HISTOPATOLÓGICO
Se observó congestión intestinal, tanto de mucosa como de submucosa y vasos de la serosa (Imagen 3) con proliferación de bacilos gram positivos de tamaño intermedio tanto en el contenido como en áreas de la lámina propia en las que se ha desprendido el epitelio (Imagen 4). Las lesiones indicaban un proceso digestivo de origen bacteriano por Clostridium sp. con posible implicación de E. coli.
COMENTARIO DEL CASO
Los resultados globales del diagnóstico laboratorial apuntan a Clostridium perfringens tipo A positivo a toxina Beta-2 como principal agente implicado en el proceso diarreico con la posible participación de Escherichia coli F17.
CASO 2 Colibacilosis neonatal
En una explotación donde se presentaban diarreas neonatales por E. coli desde hace varias parideras, se remitieron 5 hisopos rectales de corderos de 2-5 días de vida con diarrea para su análisis laboratorial.
- CULTIVO MICROBIOLÓGICO
En todas las muestras se aisló Escherichia coli en cultivo puro y masivo (Imagen 5).
- PCR A TIEMPO REAL
Se detectó Clostridium perfringens en moderada concentración (Cq: 26,68) en todas las muestras estudiadas. Se descartó la implicación de Rotavirus A y Cryptosporidium parvum.
- FACTORES DE VIRULENCIA DE E. COLI
Las muestras fueron positivas a los factores de virulencia de Escherichia coli gen eae y la fimbria F17, ambos en elevada concentración (Cq: 21,8) y (Cq: 19,98) respectivamente, que indican la presencia de cepas de Escherichia coli con capacidad patógena.
- COMPARACIÓN FENOTÍPICA DE CEPAS DE E. COLI
Se compararon los aislados de E. coli obtenidos en este caso con las cepas mayoritarias localizadas en casos anteriores en esta misma explotación (Imagen 6). En el caso actual se encontraron varias cepas que ya habían sido aisladas previamente:
-
- CEPA 1, positiva para el gen eae
- CEPA 4 y CEPA 12, portadoras de la fimbria F17
- CEPA 15, no había sido encontrada previamente en analíticas anteriores.
COMENTARIO DEL CASO
En el caso actual se confirma la presencia de Escherichia coli patógeno (cepas gen eae y F17) como posible causa de las diarreas. Se han encontrado cepas nuevas a las detectadas previamente en la explotación, lo que puede justificar que haya disminuido la eficacia de las medidas tomadas tras los primeros casos.
CASO 3 Cryptosporidiosis
Se recibieron muestras de digestivo de corderos lactantes de menos de 15 días de edad.
- OBSERVACIONES MACROSCÓPICAS
El intestino delgado presentaba un contenido líquido de coloración amarillento verdosa (Imagen 7).
- CULTIVO MICROBIOLÓGICO
En todas las muestras se aisló Escherichia coli en cultivo puro y masivo.
- PCR A TIEMPO REAL
- FACTORES DE VIRULENCIA DE E. COLI
Se localizaron los factores de virulencia de Escherichia coli gen eae y la fimbria F17 que indican la presencia de cepas de Escherichia coli con capacidad patógena, pero en baja concentración (Cq: 32,31) y (Cq: 31,30) respectivamente
- ESTUDIO HISTOPATOLÓGICO
En el intestino delgado se observó un cierto acortamiento y ensanchamiento de las vellosidades, con infiltrado de linfocitos y macrófagos, y una intensa proliferación de Cryptosporidium spp que ocupa amplias áreas de la superficie epitelial (Imagen 8) provocando en algunos casos la alteración en la morfología del epitelio (pérdida de microvellosidades y superficie irregular de las células). En el colon se observó una proliferación de Cryptosporidium spp, menos acusada que en el intestino delgado. No se apreciaron alteraciones en la mucosa ni proliferación bacteriana.
COMENTARIO DEL CASO
Los únicos patógenos detectados fueron Cryptosporidium y E. coli. Las lesiones histopatológicas observadas se asocian con Cryptosporidium spp., sin existir lesiones que indiquen la implicación de E. coli.
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