En pequeños rumiantes, los problemas reproductivos tienen una gran repercusión debido a las pérdidas productivas y económicas que causa la aparición de un brote de abortos.
Estos se caracterizan, principalmente, por procesos abortivos en el último tercio de gestación, y su etiología puede ser de diversa naturaleza:
- Fallos nutricionales
- Estrés
- Intoxicación por plantas o tóxicos
- Enfermedades infecciosas, entre otras
Para establecer una primera aproximación al diagnóstico es esencial realizar una buena anamnesis, recogiendo los datos relacionados con el número de animales afectados, su edad y momento reproductivo, los signos clínicos que presentan y las lesiones a nivel de placenta y feto.
Por último, también es muy útil conocer el plan vacunal de la explotación y su historial de enfermedades para orientar la toma de muestras y su posterior análisis en el laboratorio.
Los principales agentes infecciosos causantes de abortos en pequeños rumiantes son:
- Chlamydia abortus y Coxiella burnetii: son los agentes etiológicos más prevalentes y causan abortos que se caracterizan por placentitis necróticas y expulsión de fetos sin lesiones aparentes.
- Brucella sp. (B. mellitensis, B. abortus, B. ovis): estas bacterias causan abortos en la segunda mitad de gestación con placentitis necrótica y fetos frescos; en machos causan orquitis e infertilidad.
- Salmonella sp. (S. enterica abortus ovis y S. typhimurium): la salmonelosis causa fiebre y metritis en las reproductoras y lesiones purulentas y necróticas a nivel de placenta y feto.
- Campylobacter sp. (C. fetus, C. jejuni, C. coli): el aborto vibriónico se caracteriza por una placentitis necrótica y lesiones de necrosis focal en el hígado fetal, aunque las lesiones no se observan en todos los casos.
- Border disease: el virus Border puede causar tanto problemas de infertilidad como abortos, observándose con frecuencia fetos malformados y sintomatología nerviosa en los recién nacidos.
- Toxoplasma gondii: dependiendo del momento de la infección, este parásito puede causar infertilidad, abortos con fetos momificados, mortinatos o nacimiento de animales con toxoplasmosis congénita.
TOMA DE MUESTRAS
- Placenta y feto son los órganos diana de los agentes infecciosos mencionados, por ello se consideran las muestras más adecuadas para el diagnóstico laboratorial directo (detección de virus, bacterias o parásitos).
Sin embargo, el acceso, conservación y envío de este tipo de muestras puede resultar difícil y costoso en algunas ocasiones.
- Hisopos vaginales de hembras abortadas en las 72 horas previas a la recogida son una muestra válida que permite aumentar el número de animales analizados, siendo el resultado laboratorial más representativo del proceso presente en la explotación.
Pasadas las 72 horas, la detección del agente causal en exudados vaginales es poco probable, siendo el momento de la toma de muestra un punto crítico para evitar falsos negativos.
- Muestra de suero de las reproductoras para el diagnóstico indirecto mediante serología. Las técnicas serológicas permiten valorar la respuesta inmunológica frente a un agente infeccioso, sin embargo su interpretación es compleja pues una seropositividad puede indicar tanto contacto previo con el agente, como presencia de anticuerpos vacunales.
La PCR a tiempo real (qPCR) es una técnica con gran sensibilidad y especificidad que permite el diagnóstico directo del agente infeccioso mediante la amplificación de su ácido nucléico; su alta sensibilidad permite realizar pools de varias muestras, aumentando de esa forma la probabilidad de encontrar al agente causal (en Exopol se analizan un máximo de 5 muestras en un mismo pool).
OBJETIVO DEL ESTUDIO
Frecuentemente, veterinarios y ganaderos reflejan la dificultad de enviar un número significativo de fetos y placentas para llegar a un diagnóstico concluyente.
De cara a facilitar la toma y envío de muestras asegurando la máxima sensibilidad diagnóstica, en Exopol estamos realizando un estudio comparativo entre diferentes tipos de muestras.
Este estudio evalúa dos tipos de muestra de fácil recogida y conservación:
- Hisopado de placenta
- Muestra de lengua del feto
El hisopado directo de la placenta abortada, tanto de cotiledones como de espacio intercotiledóneo, es una muestra más sencilla de conservar y enviar que las placentas. Además, permite aumentar el número de animales a muestrear en un único análisis al poder hacer pools de hisopos vaginales e hisopados de placenta de hembras recién abortadas.
Por otro lado, la lengua del feto es un órgano muy vascularizado que, en otros sectores como el porcino, se analiza de manera rutinaria en programas de monitorización de enfermedades víricas con afección reproductiva, como el PRRS y el Circovirus tipo 2.
Los fragmentos de lenguas se pueden conservar congelados a -20ºC hasta su envío al laboratorio.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se seleccionaron 35 casos de abortos en pequeños rumiantes que incluían muestras de feto y placenta.
Las muestras fueron procesadas siguiendo el Protocolo Normalizado de trabajo del laboratorio, que establece realizar un pool de placenta y órganos del feto (contenido abomasal, hígado, pulmón y encéfalo) para la detección mediante qPCR de los principales agentes causantes de aborto (Chlamydia abortus, Coxiella burnetii, Salmonella enterica, Campylobacter sp. y Toxoplasma gondii).
Posteriormente, los casos con resultados positivos a alguno de los agentes estudiados se volvieron a testar con el fin de valorar la sensibilidad de cada tipo de muestra en relación al pool de muestras establecido en el protocolo rutinario de diagnóstico:
- Placenta
- Órganos del feto (contenido abomasal, hígado, pulmón y encéfalo)
- Hisopado de la placenta (cotiledones y zona intercotiledónea)
- Lengua del feto
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos hasta la fecha demuestran que, tanto en hisopo de placenta como en lengua fetal, se detectan los agentes patógenos más importantes que ocasionan abortos en pequeños rumiantes; se obtuvieron resultados similares de detección de positivos mediante qPCR en todos los tipos de muestras (Tabla 1).
La recogida de un hisopo de placenta, en lugar de la placenta completa, es válida para los agentes infecciosos que tienen tropismo por la misma y actúan causando lesiones en ella.
La muestra de lengua fetal es un tejido muy vascularizado donde se detectan la mayoría de los agentes infecciosos causantes de abortos.
En el caso de Toxoplasma gondii se obtiene una menor sensibilidad respecto al pool de órganos fetales, con 5 resultados positivos de un total de 6 casos analizados.
Esto podría justificar la ausencia de detección en el pool de las dos lenguas fetales, ya que el parásito se encontraba en baja concentración solo en uno de los fetos, sin embargo, es necesario valorar la sensibilidad del diagnóstico de Toxoplasma gondii en lenguas con un número mayor de muestras.
La muestra de lenguas negativa correspondía a un caso compuesto por dos fetos y una placenta: la placenta y uno de los fetos presentaban una concentración media-baja de T. gondii (Cq=36), y el otro feto era negativo.
Los resultados preliminares indican que con un muestreo conjunto de hisopo de placenta y lengua del feto se alcanza una sensibilidad similar a la obtenida al analizar la placenta y el pool de órganos del feto.
Esto facilita la recogida y envío de muestras al laboratorio, permitiendo analizar muestras de varios abortos en un mismo análisis.
Nuestros resultados también han demostrado que cuando hay un agente principal en gran concentración, éste se detecta en todas las muestras individuales.
Sin embargo, cuando la concentración es baja (Cq>33), la detección del mismo en todas las muestras individuales no siempre es posible.
En la mayoría de estos casos encontramos simultáneamente un agente en elevada concentración, siendo probable que éste sea el agente primario del proceso.
CONCLUSIÓN
La toma de muestras de procesos abortivos a nivel de campo es compleja, puesto que, en muchas ocasiones, no hay acceso a las muestras idóneas o no es posible el envío de las mismas.
La selección de muestras más fáciles de manejar, como el hisopado de placenta o una muestra de lengua fetal, puede facilitar tanto la recogida de muestras como el análisis laboratorial.
Los resultados preliminares obtenidos en este estudio revelan que este nuevo método de muestreo es adecuado para llegar a un diagnóstico definitivo, y proporciona la opción de aumentar el número de animales analizados.
Estos son los primeros avances, no obstante, seguimos ampliando el estudio para poder sacar conclusiones más firmes e incluir enfermedades reproductivas menos frecuentes, aunque también importantes, como la enfermedad de Border y Neospora caninum.
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